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EvaGreen® 是一种用于实时定量 PCR ( qPCR )的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I 。除了有相似的光谱特性, EvaGreen® 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I 。

首先, EvaGreen® 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I 。因此,使用 EvaGreen® 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤。同时, EvaGreen 在实验中可以使用较高的浓度,从而获得远强于 SYBR Green I 扩增信号(图 1)。较高浓度的 EvaGreen 也消除了“染料重分布”的缺陷,使 EvaGreen 既可用于多重 PCR ,也可用于高分辨率(高清晰)熔解曲线分析( HRM )(图 4 )。该分析正被越来越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析 。由于 SYBR Green I 对 PCR 的抑制性,从而要求其使用浓度必须很低,因此 SYBR Green I 无法解决由低浓度造成的染料重分布问题,既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同时,染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性,因为低熔点的 DNA 链可能由于这种原因而无法检测到 。

第二, EvaGreen 的稳定性极强。在正常的储存、操作和 PCR 过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里,也可以反复冻融。与之相反, SYBR Green I 不稳定而且降解后对 PCR 抑制性更强 。

EvaGreen 降低了细胞膜透性,因而比 SYBR Green 1 更加安全(图 6 )。独立实验室的测试结果显示, EvaGreen 既没有诱变性也没有细胞毒性 。相反,虽然 SYBR Green I 本身诱变性很弱,但它在细胞中可能抑制了正常 DNA 的修复机制,使其有诱变增强作用 。考虑到 PCR 的广泛使用,其安全性应该足够重视。

除 EvaGreen 20 × (#31000) 可稀释 20 倍后用于 qPCR 外,BIOTIUM 公司还提供多种结合 Cheetah Taq(Biotium公司的一种新型化学修饰的热启动 DNA 聚合酶)的 Fast EvaGreen Msater Mix 。