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描述

Thermo Scientific LightShift化学发光EMSA试剂盒是一种非常强劲且灵敏的检测系统，通过进行电泳迁移率实验(EMSA)检测蛋白质-DNA结合相互作用。这个试剂盒包括用于建立和定制DNA结合反应的试剂，用于验证体系的一组对照DNA和蛋白提取物，作为探针去识别生物素标记靶DNA的稳定链霉亲和素-HRP偶联物，以及非常灵敏的用于检测的化学发光底物。

LightShift 化学发光EMSA试剂盒的特点：

• 检测胞核抽提物中低丰度蛋白的理想选择
• 灵敏度超越放射性和地高辛检测法
• 兼容之前建立的常规DNA-蛋白互作结合条件
• 包括EBNA对照系统，帮助新用户建立一个适当的检测体系，了解用于确定相互作用特异性的方法

LightShift EMSA检测的原理与蛋白免疫印迹类似。生物素末端标记的双链DNA与细胞核提取物或纯化的因子共同孵育，之后进行非变性凝胶电泳。然后将DNA快速（30分钟）转印至带正电的尼龙膜上，进行紫外交联，然后使用HRP标记的链霉亲和素-HRP偶联物检测，再与底物孵育。从标记到获得结果的整个实验流程可以在一天内完成。

蛋白与DNA之间的相互作用对于DNA复制、重组和修复、转录和病毒组装等许多细胞进程具有关键调控作用。电泳迁移率实验(EMSA)是研究基因调控和确定蛋白:DNA之间相互作用的核心技术之一。

EMSA技术基于一个实验发现：即在非变性聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶电泳过程中，蛋白:DNA复合物的迁移速度比自由的DNA分子更慢。由于蛋白结合使DNA的迁移速率发生了偏移或延迟，这个方法也被称为凝胶迁移或凝胶阻滞分析。在EMSA技术出现之前，蛋白:DNA之间相互作用主要是通过硝化纤维素膜过滤实验分析。

整个实验中需要实验者准备的是已纯化的末端生物素标记的目标DNA，待检测的蛋白提取物，尼龙膜和基本电泳设备。目标DNA可在合成的同时进行5'或3'端生物素标记，或在合成之后使用Thermo Scientific生物素3'末端DNA标记试剂盒（产品货号89818）进行标记。用户可通过不同方法获得胞核、胞质或全细胞蛋白提取物，包括Thermo Scientific NE-PER 核蛋白和胞质蛋白提取试剂盒（产品货号78833）。

规格

内容及储存

Sufficient For: 100 binding reactions and detection on 800 cm2of membrane (10 mini-gel blots)
• 10X Binding Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Biotin-EBNA Control DNA, 50 µL (store at -20°C)
• Unlabled EBNA DNA, 50 µL (store at -20°C)
• EBNA Extract, 125 µL (store at -20°C)
• Poly(dl·dC), 125 µL (store at -20°C)
• 50% Glycerol, 500 µL (store at -20°C)
• 1% NP-40, 500 µL (store at -20°C)
• 1 M KCl, 1 mL (store at -20°C)
• 100mM MgCl2, 500 µL (store at -20°C)
• 200mM EDTA, pH 8.0, 500 µL (store at -20°C)
• 5X Loading Buffer, 1 mL (store at -20°C)
• Stabilized Streptavidin-HRP, 1.5 mL (store at 4°C)
• Luminol/Enhancer Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Stable Peroxidase Solution, 80 mL (store at 4°C)
• Blocking Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• 4X Wash Buffer, 500 mL (store at 4°C)
• Substrate Equilibration Buffer, 500 mL (store at 4°C)